CMV RESISTENCIA GENOTIPICA A, ANTIVIRAIS, plasma

Orientações para o cliente

• Não é necessário preparo para este exame;
• Este teste é validado para amostras com carga viral igual ou superior a 1500 UI/mL. Amostras com cargas virais inferiores a 1500 UI/mL podem ser avaliadas, porém o resultado pode ser inconclusivo por falha de detecção do Citomegalovírus (CMV) ou de mutações eventualmente presentes. Neste caso, não será realizado reembolso, visto que todas as etapas do exame são executadas;
• Não é possível realizar o exame em amostras sem carga viral detectada (resultado negativo);
• Este exame pesquisa mutações associadas à resistência de CMV a Ganciclovir, Foscarnet, Cidofovir, Maribavir, Letermovir, Filociclovir e Brincidofovir

Orientações necessárias

• Não é necessário preparo para este exame;
• Este teste é validado para amostras com carga viral igual ou superior a 1500 UI/mL. Amostras com cargas virais inferiores a 1500 UI/mL podem ser avaliadas, porém o resultado pode ser inconclusivo por falha de detecção do Citomegalovírus (CMV) ou de mutações eventualmente presentes. Neste caso, não será realizado reembolso, visto que todas as etapas do exame são executadas;
• Não é possível realizar o exame em amostras sem carga viral detectada (resultado negativo);
• Este exame pesquisa mutações associadas à resistência de CMV a Ganciclovir, Foscarnet, Cidofovir, Maribavir, Letermovir, Filociclovir e Brincidofovir.

Processamento e adequação da amostra

Unidades com Distribuição:

• Receber a amostra em embalagem REF e mantê-la nesta condição até a manipulação.
• Centrifugar o material no máximo até 4 horas após a coleta por 10 minutos, a 2200 g, a 18 °C.
• Enviar no próprio tubo de coleta refrigerado até 48 horas após a coleta.
• ATENÇÃO: NÃO RECEBER amostras intensamente hemolisadas, lipêmicas ou hiperbilirrubinêmicas.

Unidades sem distribuição:

• A amostra deve ser acondicionada imediatamente após a coleta em embalagem REF padronizada que deve estar acondicionada na base da caixa de transporte em contato direto com o gelox.
• Montagem de embalagem REF :

-- Utilizar uma caixa de isopor de 3 litros

-- Forrar a base e as laterais menores com gelox.

-- A grade branca de coleta deve ficar entre os gelox das laterais e em contato com o gelox da base

-- O gelox desta caixa devem ser substituídos a cada 5 horas.

Estabilidade da amostra:

• Temperatura ambiente: não aceitável;
• Refrigerada (2-8 °C): 48 horas;
• Congelada (-20 °C): 1 mês.

Método

Sequenciamento de nova geração (NGS) dos genes UL27, UL51, UL54, UL56, UL89 e UL97 do CMV.

Valor de referência

Ausência de mutações

Interpretação e comentários

A infecção por CMV refratária ao tratamento é definida pela viremia (carga viral) que aumenta (pelo menos 1 log) após pelo menos 2 semanas de terapia antiviral com dosagem adequada. Geralmente, se deve à resistência a antivirais da linhagem de CMV envolvida na infecção, definida pela presença de alteração genética que diminui a suscetibilidade a um ou mais medicamentos. Essas alterações podem ser detectadas por meio do sequenciamento do DNA do CMV, em busca de mutações em genes alvos específicos que foram previamente descritas como associadas à resistência aos antivirais disponíveis.

Este exame busca inferir resistência genotípica do CMV com base em mutações nos genes UL27, UL51, UL54, UL56, UL89 e UL97, por meio de sequenciamento de nova geração (NGS), utilizando um banco curado de mutações (HerpesDRG DB v03112024). Desse modo, avalia a resistência aos seguintes medicamentos: Ganciclovir, Foscarnet, Cidofovir, Maribavir, Letermovir, Filociclovir e Brincidofovir.

O método envolve a extração do DNA viral, amplificação das regiões-alvo e sequenciamento, com análise dos dados conforme parâmetros de qualidade, incluindo cobertura média de 100x.O teste identifica padrões de resistência no CMV em 95% das amostras com carga viral ?1500 UI/mL, e 80% das amostras com carga viral ? 1000 UI/mL. Mutações com frequência <15% na população viral podem não ser detectadas.

É importante destacar que o perfil genotípico obtido pode não refletir completamente o fenótipo do vírus quando exposto aos medicamentos. Portanto, os resultados devem ser interpretados em conjunto com o histórico de tratamentos do paciente e outros dados clínicos.