Hibridação in situ por fluorescência, PARA O GENE HER2(ERBB2), Vários Materiais

Orientações para o cliente

• Este exame é realizado em tecido de mama, ovário, cólon, estômago, pulmão, endométrio, mas pode ser feito também em outras amostras clínicas (outros tipos de tumor).
• Fragmentos de tecido incluídos em bloco de parafina precisam ser acompanhados da cópia do laudo original de imunoistoquimico ou anatomopatológico
• Para preservar a qualidade técnica da amostra e da análise, recomenda-se cuidados com o processamento de materiais fixados e embebidos em parafina. Portanto, deve-se atentar aos seguintes fatores pré-analíticos, como: 1- Tempo de isquemia: a amostra deve ser fixada idealmente em até 10 minutos após a sua retirada, sendo aceitável em até 1 hora. 2- Fixação: a)- Fixador: utilizar formalina tamponada a 10%, com pH na faixa de 6,9 e 7,1. b)- Volume de fixador: mínimo de 5:1, preferível de 10:1, sendo que a amostra deve estar completamente submersa no fixador. Observação: em caso de amostras grandes, caso a macroscopia não seja realizada imediatamente, estabelecer fluxo de clivagem do material para permitir fixação adequada de toda a amostra. c) Duração da fixação: mínimo de 6 horas, máximo de 24-48 horas (a depender da amostra). Caso isso não tenha sido feito no laboratório que processou inicialmente o emblocamento, pode não ocorrer a hibridação e o resultado ser inconclusivo.

Orientações necessárias

• Este exame é realizado em tecido de mama, ovário, cólon, estômago, pulmão, endométrio, mas pode ser feito também em outras amostras clínicas (outros tipos de tumor).
• Fragmentos de tecido incluídos em bloco de parafina precisam ser acompanhados da cópia do laudo original de imunoistoquimico ou anatomopatológico
• Para preservar a qualidade técnica da amostra e da análise, recomenda-se cuidados com o processamento de materiais fixados e embebidos em parafina. Portanto, deve-se atentar aos seguintes fatores pré-analíticos, como: 1- Tempo de isquemia: a amostra deve ser fixada idealmente em até 10 minutos após a sua retirada, sendo aceitável em até 1 hora. 2- Fixação: a)- Fixador: utilizar formalina tamponada a 10%, com pH na faixa de 6,9 e 7,1. b)- Volume de fixador: mínimo de 5:1, preferível de 10:1, sendo que a amostra deve estar completamente submersa no fixador. Observação: em caso de amostras grandes, caso a macroscopia não seja realizada imediatamente, estabelecer fluxo de clivagem do material para permitir fixação adequada de toda a amostra. c) Duração da fixação: mínimo de 6 horas, máximo de 24-48 horas (a depender da amostra). Caso isso não tenha sido feito no laboratório que processou inicialmente o emblocamento, pode não ocorrer a hibridação e o resultado ser inconclusivo.

Processamento e adequação da amostra

Encaminhar à Anatomia Patológica o material em formol a 10% tamponado ou a amostra em bloco de parafina juntamente com a solicitação médica e a cópia do laudo original em temperatura ambiente.

Método

A análise é feita por hibridação in situ por fluorescência (FISH), uma técnica citogenética baseada no uso de uma sonda de DNA, marcada com fluorocromo, que se liga ao DNA-alvo complementar.

Valor de referência

Controle normal: Amplificação < 2.0

Interpretação e comentários

• O proto-oncogene HER-2/neu (c-erbB2) se localiza no braço longo do cromossomo 17 (17q11.2-q12) e codifica um receptor de crescimento transmembrana que estimula a divisão celular e a evolução da lesão. A amplificação ou a expressão aumentada desse gene ocorrem em torno de 20% a 30% dos carcinomas invasivos da mama. Já a correlação entre a expressão elevada da proteína e a amplificação do gene HER-2/neu é observada em 90% desses tumores. A detecção da amplificação por Fish funciona como um marcador para predizer a resposta ao trastuzumabe (Herceptin®), especialmente quando o resultado da expressão proteica é considerado equívoco (2+). Dessa forma, a Fish para HER-2/neu tem, como principal indicação, os pacientes com resultados equívocos de imuno-histoquímica.